| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 782-1 | ||||
Resumo:Fungos filamentosos destacam-se como produtores de protease, sendo amplamente relatados na literatura pelo seu potencial na obtenção de enzimas colagenolíticas. Devido a seu potencial biotecnológico o fungo Mucor subtilissimus vem sendo explorado para produção de proteases. Uma vez que obtenção de enzima colagenolítica é de grande importância para diversas aplicações industriais e terapêuticas, é importante que sejam exploradas alternativas para produção dessas enzimas a partir de microrganismos com alto potencial biotecnológico. Sendo assim, o objetivo deste trabalho é avaliar a capacidade de um fungo isolado da caatinga na produção de proteases colagenolíticas. Para isto, foi utilizado o fungo filamentoso Mucor subtilissimus UCP 1262, fermentado com 3,0 g de farelo de umidade de 50% a 25°C por 72h. A extração foi realizada usando 7,5 mL de tampão de fosfato de sódio 245 mM, pH 7, para cada grama de substrato. O extrato bruto foi submetido a processos de precipitação com acetona a 70%, seguido por cromatografia de troca iônica com DEAE-Sephadex em sistema de purificação AKTA Start. Após purificação foram realizadas atividades de dosagem proteica com kit BCA utilizando albumina como padrão e atividade colagenolítica utilizando Azocoll como substrato, onde a atividade foi realizada com 50μL de amostra e 5mg de substrato diluído em tampão fosfato de sódio pH 8 sob agitação a 37°C por 1h. Como resultado, podemos observar que após 72h houve crescimento significativo do microrganismo, demonstrando que o farelo de trigo é um excelente substrato para fermentação com o objetivo de produzir proteases com atividade colagenolítica, especialmente nas condições observadas. Em relação a dosagem proteica, observa-se que o processo de purificação foi capaz de reduzir a quantidade de proteínas poluentes uma vez que foi observado até 62,7 mg/mL de proteínas no extrato bruto e somente 1,30 mg/mL após os processos de purificação. Já em relação a atividade colagenolítica, observou-se o contrário, demonstrando que o processo de purificação foi capaz de concentrar a protease uma vez que no extrato bruto foi documentado 3,44 U/mg, no extrato precipitado com acetona 5,51 U/mg e após a cromatografia 126,41 U/mg, exibindo um fator de purificação de aproximadamente 36x. Esses resultados destacam o potencial biotecnológico do fungo Mucor subtilissimus para a produção de proteases com atividade colagenolítica, que são de grande importância para diversas aplicações biotecnológicas. A utilização de processos de fermentação e purificação adequados pode levar à obtenção de proteases mais puras e concentradas, abrindo caminho para o desenvolvimento de produtos e terapias mais eficazes. Portanto, o estudo contribui para o avanço no campo da biotecnologia e na busca por alternativas sustentáveis para a produção de enzimas com propriedades específicas. Palavras-chave: Colágeno, Enzima, Fermentação em estado sólido, Fungo filamentoso, Protease Agência de fomento:CAPES; FACEPE. | |||||